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          為什么細胞要聚團

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          點擊次數:898 更新時間:2022年12月06日16:30:46 打印此頁 關閉

          細胞為啥總是一言不合就抱團生長?!

          是細胞污染了還是正?,F象?

          是消化不好了還是鋪板有問題?

          抱團細胞越來越多,怎么樣才能讓細胞分開生長?

          請認真閱讀以下干貨,看看能否幫您答疑解惑!

          細胞抱團一定代表細胞狀態不好嗎?

          細胞生長的時候肯定是要相互聯系,大部分的細胞都是要成片生長的,應該仔細觀察每種細胞的狀態,抱團并不一定代表不好:

          • 1. 若細胞輪廓清晰,可看清楚一個個的細胞,像葡萄一樣,一串串的,就是狀態好的,說明細胞在分裂。

          • 2. 但大部分細胞抱團絕對不是一件好事!如果輪廓消失,出現細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差,就是細胞死亡了。葡萄狀和抱團,在鏡下其實很容易區別。抱團死亡的細胞可以看到細胞碎片,如下圖:

           

          RAW264.7細胞-正常狀態 RAW264.7細胞-異常狀態

           

          H9c2細胞-正常狀態 H9c2細胞-異常狀態


          • 3. 細胞抱團是因為細胞污染了嗎?一般細胞培養液清亮,就不是污染。如果是污染了的話,可以通過觀察培養液顏色,若污染,則很渾濁。

          細胞為啥總是喜歡抱團?

          • 1. 細胞死亡釋放出DNA,纏繞其他細胞,形成黏性的細胞團(消化的過程可能過于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太強或有毒性等)。

          • 2. 細胞離心速度過大或時間太長。

          • 3. 消化不完全的時候,細胞和細胞之間的連接沒有分開;消化過度的時候,圓形的細胞容易聚堆,再分開很困難!

          • 4. 狀態不好、老化的細胞,也可能會出現抱團生長的情況(比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態差)。

          • 5. 傳代時沒有吹打均勻,細胞團多,培養時就會是一團一團的。

          • 6. 傳代后細胞鋪板不均勻。

          • 7. 有可能是雜細胞,或者死細胞。

          • 8. 細胞未消化開。

          • 9. 非震蕩培養或細胞量過多的話就會成團。

          如何避免細胞抱團?

          • 1. 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。

          • 2. 對于貼壁非常牢固的細胞(如MDCK),為了細胞更好的狀態,更漂亮的樣子,建議分多批多次消化,這樣才能最大限度地降低胰酶對細胞的損傷,保證細胞的狀態能夠最優。

          • 3. 細胞生長密度不要太高,70%-80%就好(細胞剛剛基本成單層細胞,沒有出現堆疊生長),這樣細胞抱團的幾率就大大減少了。如果細胞已經長成集落,可先將細胞低密度傳代,第二天再消化傳代,這樣連續傳三次,細胞抱團就會越來越小,這樣幾代過后,再按照常規消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個的。

          • 4. 消化過程中最好不要使勁搖動培養瓶,這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(因為細胞沒有受力點了,所以細胞很難分散開)。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,嚴格控制好消化程度。

          • 5. 消化過程需要使用槍頭輕輕吹打,切忌使勁拍培養瓶的側壁。拍瓶子想要將細胞拍散的力度對于細胞來說相當于大地震,細胞本身是無法承受如此振蕩的。

          細胞抱團了,要如何處理?

          • 1. 如果細胞抱團不影響生長就沒問題,只是計數的時候要麻煩點了。

          • 2. 如果感覺有死細胞的DNA,在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞,防止對細胞膜造成物理損傷。

          • 3. 如果細胞抱團是肉眼可見的,那就讓細胞靜置半分鐘左右,然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見,那可能沒有特別好的分離方法,只能等細胞狀態改善后將這部分細胞慢慢排除出去。



          conclusion

          總結

          引起細胞抱團的根本原因是細胞狀態變差,且在吹打細胞的時候,那些狀態好的細胞也會因為多次吹打而受損,所以我們認為最根本的解決方法是摸透培養的細胞的生長習性,讓細胞保持較好的生長狀態。

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